Inhaltsangabe

I.	Einleitung	1
1.	Grundlagen der Signal-Transduktion im kardiovaskulären System	1
2.	Komplexität von Signal-Transduktionsvorgängen	5
3.	Fragestellungen	7
3.1.	Kompartimentierung von Adenosinbindungsstellen	7
3.2.	Extra- und intrazelluläre Kompartimente endothelialer Proteinkinasen	8
3.3.	Kompartimentierung von Proteinkinase C Substraten des Kardiomyozyten	8
3.4.	Interaktionen zwischen α1- und β-adrenerger Signaltransduktion des Kardiomyozyten	9
II.	Methodik	10
1.	Isoliert perfundiertes Herz	10
2.	Isolation von Kardiomyozyten	10
3.	Isolierung und Kultur von Endothel	12
4.	Proteinphosphorylierung	14
4.1.	Intrazelluläre Proteinphosphorylierung von intakten Kardiomyozyten	14
4.2.	Nachweis endothelialer Ektoproteinkinasen	15
5.	Nachweis phosphorylierter Proteine	17
6.	Rezeptorbindungsstudien	17
7.	cAMP-Bestimmung mittels Proteinbindungsassay	18
8.	Analytische Methoden	19
8.1.	Bestimmung von ATPase-Aktivitäten	19
8.2.	LDH-Freisetzung von Endothelzellen	20
8.3.	Trypan Blau Ausschluß	20
9.	Statistik	20
III.	Ergebnisse	21
1.	Kompartimentierung von Adenosinbindungsstellen	21
1.1.	Funktionelle Bedeutung extra- bzw. intrazellulärer Adenosinbindungsstellen am nicht adrenerg stimulierten Herz	21
1.2.	Funktionelle Bedeutung extra- und intrazellulärer Adenosinbindungsstellen am Isoproterenol-stimulierten Herz	22
1.3.	Der koronarvenöse cAMP-Efflux als Maß der Adenylatzyklaseaktivität	25
1.4.	Einfluß von Adenosin und 2',5'-Dideoxyadenosin auf den koronarvenösen cAMP-Efflux	26
1.5.	Einfluß von 2',5'-Dideoxyadenosin auf den koronarvenösen cAMP-Efflux am Isoproterenol-stimulierten Herzen	28
1.6.	Einfluß einer Blockade extrazellulärer Adenosinrezeptoren auf die kardialen Effekte von Adenosin und 2',5'-Dideoxyadenosin	28
2.	Extra- und intrazelluläre Kompartimente endothelialer Proteinkinasen	32
2.1.	Zelloberflächenproteine als Substrate der endothelialen Ektoproteinkinase	32
2.2.	Serumproteine als Substrate der endothelialen Ektoproteinkinase	34
2.3.	Einfluß zyklischer Nukleotide auf die endotheliale extrazelluläre Proteinphosphorylierung	36
2.4.	Phosvitin als Substrat der endothelialen Ektoproteinkinase	36
2.5.	Zelluntergang als mögliche Ursache der Freisetzung von Proteinkinaseaktivität	39
2.6.	Extrazellulärer ATP-Abbau durch Endothelzellen	41
3.	Kompartimentierung von Proteinkinase C Substraten des Kardiomyozyten	43
3.1.	Proteinphosphorylierungsmuster bei Stimulation intakter Kardiomyozyten mit Isoproterenol, Methoxamin bzw. Tetradecanoylphorbolacetat	43
3.2.	Zelluläre Lokalisation des 15 kDa Proteins	50
4.	Interaktion zwischen α1 und β-adrenerger Signaltransduktion des Kardiomyozyten	52
4.1.	Einfluß einer α1-adrenergen Stimulation aud den Isoproterenolinduzierten Anstieg der myokardialen Kontraktilität	52
4.2.	Einfluß von Methoxamin auf den Glukagon-induzierten Kontraktilitätsanstieg	55
4.3.	Einfluß von Methoxamin auf die Herzfrequenz unter Basalbedingungen bzw. bei Isoproterenol-Stimulation	56
4.4.	Bindungseigenschaften von Methoxamin an kardialen β-Adrenozeptoren	57
4.5.	Einfluß einer α1-adrenergen Stimulation auf das Isoproterenolinduzierte Phosphorylierungsmuster	58
IV.	Diskussion	62
1.	Kompartimentierung von Adenosinbindungsstellen	62
2.	Extra- und intrazelluläre Kompartimente endothelialer Proteinkinasen	65
3.	Kompartimentierung von Proteinkinase C Substraten des Kardiomyozyten	69
4.	Interaktion zwischen α1- und β-adrenerger Signal-Transduktion des Kardiomyozyten	72
V.	Zusammenfassung	77
VI.	Literatur	83